庆大霉素对各种革兰氏阴性细菌，及革兰氏阳性细菌都有良好的抗菌作用，主要用于治疗敏感革兰氏阴性杆菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属，肠杆菌属所导致的严重感染。
比如败血症、下呼吸道感染，肠道感染，盆腔感染、腹腔感染、皮肤软组织感染，复杂性尿路感染等。在治疗腹腔感染及盆腔感染时，应该与抗厌氧菌的药物联合应用，在临床上多采用庆大霉素与其他抗菌药联合应用的方式，有时也用庆大霉素作为治疗炎症性肠病的辅助灌肠治疗。
庆大霉素是氨基糖苷类抗生素。