青霉素的主要作用与功效就是杀灭细菌，通过阻碍细菌细胞壁的合成，导致细菌膨胀、破裂、自溶而杀死细菌。青霉素还可以抗螺旋体，对病毒、真菌、立克次体、原虫等病原体没有作用。
青霉素主要用来治疗敏感细菌以及螺旋体导致的感染如咽炎、扁桃体炎、大叶性肺炎、支气管肺炎、脓胸、感染性心内膜炎、猩红热、疖、痈、丹毒、蜂窝织炎还有淋病、流脑、白喉、破伤风以及某些败血症等细菌感染。